| กองเรือยุทธการ | 2-2 | พลวกแดง ยูไนเต็ด |
| กำแพงเพชร | 1-0 | ชาตร์ตระการ ซิตี้ |
| กระบี่ เอฟซี | 0-3 | ยะลา เอฟซี |
| เอ็นเอส สีแคว ซิตี้ | 0-3 | เขลางค์ ยูไนเต็ด |
| ไพร์ม แบงคอก เอฟซี | 2-1 | จามจุรี ยูไนเต็ด เอฟซี |
| สิงห์บุรี วอร์ริเออร์ เอฟซี | 1-4 | มหาวิทยาลัยนอร์ทกรุงเทพ |
| สุพรรณบุรี เอฟซี | 3-1 | หัวหิน ซิตี้ |
| ลพบุรี เอฟซี | 2-2 | ราชนาวีอากาศ เอฟซี |
| บ้านบึง ซิตี้ | 6-0 | มาบตาพุด ระยอง เอฟซี |
| แม่โจ้ ยูไนเต็ด | 4-1 | พิจิตร ยูไนเต็ด 2021 |
| ขอนแก่น มอดินแดง เอฟซี | 2-2 | เมืองเลย ยูไนเต็ด |
| อุบล อีสเทิร์น เอฟซี | 0-0 | อุบล ครัวนภัทร เอฟซี |
| ร้อยเอ็ด ยูไนเต็ด | 0-1 | อุดร ยูไนเต็ด |
| ฉะเชิงเทรา | 0-0 | กรมศุลกากร เอฟซี |
| เมืองตรัง ยูไนเต็ด | 1-1 | สุราษฎร์ธานี ซิตี้ |